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恒溫培養(yǎng)箱在微生物檢測中的應用
閱讀：1082 發(fā)布時間：2012-4-1
常規(guī)菌檢測的目的是一種指示菌，一般以CFU/ML來計量，比如總菌數和大腸菌群，這兩個一般是用來評價食品被污染的程度，因為按常理，我們生活當中接觸的致病菌還是相對較少的，而且人體本身也具有免疫功能，所以如果這兩個指示菌如果不超標的話，我們就有理由相信該食品是相對安全的，注意：不是安全。
傳統(tǒng)的檢測方法也很簡單，一般就是培養(yǎng)富集后計數，其大致流程是這樣：^_^）
1）取樣，一般都是取25g樣品加入到225ml的生理鹽水中，取樣方法會根據樣品不同有所不同。比如肉制品，可以用剪刀剪碎。
2）計數，找一個比較容易計數的梯度進行計數，然后根據稀釋倍數反推出樣品中的微生物，計數說簡單點就是數菌落的數量，如果你涂抹夠開的話，每個培養(yǎng)前的微生物會長成一個菌落，所以個1個菌落就代表1個培養(yǎng)前的微生物。（說到這，我就想起我以前老是想，一個菌落是由很多個微生物組成的，光數菌落怎么會得出樣品中微生物的個數呢？這就是沒有考慮培養(yǎng)前與培養(yǎng)后的變化。
3）稀釋，一般來說稀釋3個梯度，10倍，100倍，1000倍，而且每個稀釋梯度要倒兩個平板。
4）均質，要保證均質的力度不能太大，如果太大有可能損害樣品中的微生物，有些檢驗人員可能就是用手捏一捏，甩一甩，也有用拍擊式均質器的
5）培養(yǎng)，把事先準備好的培養(yǎng)基（培養(yǎng)基的制備，一般要經過配比，高壓滅菌等過程，當然也有配制好的商業(yè)培養(yǎng)基，進口的有MERCK，國產的也很多，比如陸橋）倒平板，然后劃線培養(yǎng)或者涂抹均勻即可，只要保證盡量把含菌的稀釋液涂抹開，不要有菌落重疊的現象，然后放入恒溫培養(yǎng)箱的進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度與所檢測微生物不同而不同，比如大腸菌群是37度，糞大腸菌群要略高一點，具體多少，我也記得不是很清楚了
常規(guī)菌大概就是這樣啦，目前大多數檢驗單位都在使用這種傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法，其優(yōu)點就是便宜，廉價，但是比較慢，如今市面上有很多總菌數和大腸菌群的快速商業(yè)方法，比如3M，他們在紙片上提供現成的培養(yǎng)基，只需把稀釋液直接接種到培養(yǎng)基即可，相比較而言，節(jié)省了我們制備培養(yǎng)基的時間，不過貌似在培養(yǎng)時間上并沒有縮短。還有檢測培養(yǎng)基電導率方法來檢測的，因為培養(yǎng)前，培養(yǎng)基都是大分子物質，這些物質的電導率相對較低，經過微生物代謝后，被分解為小分子物質，所以電導率急劇增加，通過建一個曲線來反推微生物的個數。
致病菌的檢測是不得檢出的，所以要比常規(guī)菌要復雜，所耗時間更長，有可能還需要用沒有選擇性的培養(yǎng)基進行前增菌，然后再用選擇性培養(yǎng)基進行增菌，如果有可疑菌落再挑取利用生化反應進行鑒定。
比如沙門氏菌，檢測流程大致如下：
1）取樣，同常規(guī)菌
2）均質，同常規(guī)菌
3）前增菌，先要用無選擇性的培養(yǎng)基進行富集增菌，因為有可能樣品中所含的沙門氏菌受傷，或較少，直接用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)的話，沙門氏菌不會生長，從而出現假陰性。
4）增菌，用選擇性的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，這樣大部分的微生物在選擇性的培養(yǎng)基上都不會生長，就如同過濾一樣，如果長菌，根據菌落形態(tài)學來判斷到底是否為可疑菌落，如果沒有可疑菌落，可以判定為陰性，如果有，挑取并做生化反應鑒定是否是真的沙門氏菌
5）做生化反應進行鑒定，這里就不說了，我也不太清楚，就知道有這個流程。
傳統(tǒng)的檢測方法也很簡單，一般就是培養(yǎng)富集后計數，其大致流程是這樣：^_^）
1）取樣，一般都是取25g樣品加入到225ml的生理鹽水中，取樣方法會根據樣品不同有所不同。比如肉制品，可以用剪刀剪碎。
2）計數，找一個比較容易計數的梯度進行計數，然后根據稀釋倍數反推出樣品中的微生物，計數說簡單點就是數菌落的數量，如果你涂抹夠開的話，每個培養(yǎng)前的微生物會長成一個菌落，所以個1個菌落就代表1個培養(yǎng)前的微生物。（說到這，我就想起我以前老是想，一個菌落是由很多個微生物組成的，光數菌落怎么會得出樣品中微生物的個數呢？這就是沒有考慮培養(yǎng)前與培養(yǎng)后的變化。
3）稀釋，一般來說稀釋3個梯度，10倍，100倍，1000倍，而且每個稀釋梯度要倒兩個平板。
4）均質，要保證均質的力度不能太大，如果太大有可能損害樣品中的微生物，有些檢驗人員可能就是用手捏一捏，甩一甩，也有用拍擊式均質器的
5）培養(yǎng)，把事先準備好的培養(yǎng)基（培養(yǎng)基的制備，一般要經過配比，高壓滅菌等過程，當然也有配制好的商業(yè)培養(yǎng)基，進口的有MERCK，國產的也很多，比如陸橋）倒平板，然后劃線培養(yǎng)或者涂抹均勻即可，只要保證盡量把含菌的稀釋液涂抹開，不要有菌落重疊的現象，然后放入恒溫培養(yǎng)箱的進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度與所檢測微生物不同而不同，比如大腸菌群是37度，糞大腸菌群要略高一點，具體多少，我也記得不是很清楚了
常規(guī)菌大概就是這樣啦，目前大多數檢驗單位都在使用這種傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法，其優(yōu)點就是便宜，廉價，但是比較慢，如今市面上有很多總菌數和大腸菌群的快速商業(yè)方法，比如3M，他們在紙片上提供現成的培養(yǎng)基，只需把稀釋液直接接種到培養(yǎng)基即可，相比較而言，節(jié)省了我們制備培養(yǎng)基的時間，不過貌似在培養(yǎng)時間上并沒有縮短。還有檢測培養(yǎng)基電導率方法來檢測的，因為培養(yǎng)前，培養(yǎng)基都是大分子物質，這些物質的電導率相對較低，經過微生物代謝后，被分解為小分子物質，所以電導率急劇增加，通過建一個曲線來反推微生物的個數。
致病菌的檢測是不得檢出的，所以要比常規(guī)菌要復雜，所耗時間更長，有可能還需要用沒有選擇性的培養(yǎng)基進行前增菌，然后再用選擇性培養(yǎng)基進行增菌，如果有可疑菌落再挑取利用生化反應進行鑒定。
比如沙門氏菌，檢測流程大致如下：
1）取樣，同常規(guī)菌
2）均質，同常規(guī)菌
3）前增菌，先要用無選擇性的培養(yǎng)基進行富集增菌，因為有可能樣品中所含的沙門氏菌受傷，或較少，直接用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)的話，沙門氏菌不會生長，從而出現假陰性。
4）增菌，用選擇性的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，這樣大部分的微生物在選擇性的培養(yǎng)基上都不會生長，就如同過濾一樣，如果長菌，根據菌落形態(tài)學來判斷到底是否為可疑菌落，如果沒有可疑菌落，可以判定為陰性，如果有，挑取并做生化反應鑒定是否是真的沙門氏菌
5）做生化反應進行鑒定，這里就不說了，我也不太清楚，就知道有這個流程。