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《谷物中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽的測(cè)定》征求意見(jiàn)

2021-11-02 08:46:32 來(lái)源：儀表網(wǎng) 閱讀量：8092

　　由安康市富硒產(chǎn)品研發(fā)中心、北京市疾病預(yù)防控制中心的《谷物中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽的測(cè)定液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜用法》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)已完成征求意見(jiàn)稿的編制。為保證標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性、嚴(yán)謹(jǐn)性和適用性，現(xiàn)向社會(huì)各界公開(kāi)征求意見(jiàn)。

　　硒是人體必需微量元素之一，具有預(yù)防癌癥、清除體內(nèi)自由基，抗衰老、抗氧化等作用，能保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，對(duì)于心血管功能、生育、視力等有重要影響。缺硒會(huì)導(dǎo)致克山病、冠心病、大骨節(jié)病、糖尿病等多種疾病。雖然硒對(duì)人體而言是營(yíng)養(yǎng)元素，但研究發(fā)現(xiàn)硒的安全閾值較窄，硒攝入量超過(guò)安全閾值時(shí)則會(huì)對(duì)人體健康造成危害，發(fā)生急性或慢性硒中毒，在我國(guó)湖北恩施曾發(fā)生大范圍人、畜脫毛、脫甲等中毒癥狀，安康紫陽(yáng)也有類(lèi)似的現(xiàn)象發(fā)生，其原因?yàn)楦呶寥拉h(huán)境所致的硒中毒。因此，科學(xué)、合理的攝入硒對(duì)健康才是安全有效的。國(guó)際學(xué)術(shù)組織聯(lián)合會(huì)建議成年男女膳食硒適宜需要量分別為 40 微克/ 日和 30 微克/日。英國(guó)規(guī)定人體每日攝入量為 70 微克。1988 年，中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)推薦成人膳食的日攝入量為 50～250 微克。目前全球有 40 多個(gè)國(guó)家和地區(qū)不同程度缺硒，我國(guó) 72%地域人群缺硒，缺硒是一個(gè)世界性問(wèn)題。

　　隨著對(duì)硒元素研究的深入，人們更多關(guān)注硒的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，由于中國(guó)大部分地區(qū)缺硒，近年來(lái)各種富硒保健品、富硒食品紛紛面世，隨著功能農(nóng)業(yè)的發(fā)展，富硒農(nóng)產(chǎn)品更是百花齊放，如富硒大米、富硒小麥等富硒谷類(lèi)食品的研究日益受到人們的青睞。天然富硒農(nóng)產(chǎn)品越來(lái)越受到人們的關(guān)注，其需求量和種類(lèi)要求也越來(lái)越多。但同時(shí)市場(chǎng)上的富硒產(chǎn)品良莠不齊，消費(fèi)者對(duì)富硒產(chǎn)品的認(rèn)識(shí)不足，天然富硒農(nóng)產(chǎn)品與功能富硒農(nóng)產(chǎn)品的差異等，都急需對(duì)硒有進(jìn) 一步的研究和認(rèn)識(shí)。在自然界，硒以不同的化合物形式存在，硒的毒理學(xué)和生理學(xué)研究進(jìn)一步表明，硒的不同形態(tài)在生理毒性和生物利用率等方面各不相同，有機(jī)形態(tài)存在的硒，如硒蛋白、硒代氨基酸、硒多肽等在機(jī)體內(nèi)能轉(zhuǎn)變?yōu)樯砘钚晕镔|(zhì)，為人體所吸收利，硒的生物功能取決于有益形態(tài)的硒含量。因此，僅測(cè)定谷類(lèi)食品中總硒含量不能滿(mǎn)足目前食品安全與食品營(yíng)養(yǎng)的需要，需要進(jìn)一步測(cè)定硒在谷類(lèi)食品中的存在形式。

　　進(jìn)行硒形態(tài)研究分析，首先應(yīng)將各種硒形態(tài)化合物從樣品基體中有效的提取出來(lái)，并避免硒形態(tài)的降解和各硒形態(tài)之間的轉(zhuǎn)換。目前農(nóng)產(chǎn)品中硒形態(tài)的提取方法主要有浸提法和酶解提取法，在進(jìn)行樣品分析時(shí)，首先要根據(jù)農(nóng)產(chǎn)品中硒形態(tài)的種類(lèi)和含量，權(quán)衡前處理操作簡(jiǎn)便于否、提取效率及操作成本等進(jìn)行優(yōu)化選擇。

　　研究報(bào)道硒在農(nóng)產(chǎn)品中主要以有機(jī)硒形式存在，包括硒代氨基酸、硒蛋白、硒多糖和硒核酸等。農(nóng)產(chǎn)品樣品經(jīng)過(guò)提取處理后，需要對(duì)提取液中的硒形態(tài)進(jìn)行有效分離和準(zhǔn)確測(cè)定。目前，在硒形態(tài)分析中常用的分離方法主要為色譜分離方法，包括氣相色譜(GC)和高效液相色譜(HPLC)。電泳技術(shù)在硒形態(tài)分析中也有相關(guān)報(bào)道，主要包括毛細(xì)管電泳(CE) 和凝膠電泳(GE)。常用的檢測(cè)方法有電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)、原子熒光光譜 (AFS)、原子發(fā)射光譜(AES)、原子吸收光譜(AAS)等。本研究采用靈敏、準(zhǔn)確的高效液相色譜(HPLC)與電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行農(nóng)產(chǎn)品中硒形態(tài)化合物的分析測(cè)定。

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定谷物中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽含量的方法。

　　方法原理：

　　試樣中硒代蛋氨酸、硒酸鹽和亞硒酸鹽通過(guò)蛋白酶酶解后，經(jīng)離子交換色譜柱分離，電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測(cè)定，以色譜保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

　　儀器與設(shè)備：

　　1.液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-ICP-MS)。2.天平：感量分別為 0.01 mg、0.1 mg 和 1 mg。3.低溫離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥9000 r/min。4.恒溫超聲波清洗器：可控溫 0 ℃～80 ℃(溫度精度±2 ℃)。5.pH 計(jì)：精度為 0.01。6.高速粉碎機(jī)：轉(zhuǎn)速≥3000 r/min。7.水系濾膜：0.22 μm。

　　樣品預(yù)處理：

　　大米、小麥、玉米等樣品去雜物后粉碎，并過(guò) 60 目篩混合均勻，裝入潔凈聚乙烯瓶中，于干燥處密封保存?zhèn)溆谩?br />

　　試樣提?。?br />

　　稱(chēng)取 0.1 g～0.5 g(精確到 0.001 g)樣品，置于 15 mL 離心管中，加入 5 mL 水和 20 mg 蛋白酶 XIV，渦旋 30 s，37 ℃水浴超聲 3 h，期間振搖數(shù)次。靜置 10 min，4 ℃下以 9000 r/min 離心 10 min，取上清液過(guò) 0.22 μm 濾膜，待測(cè)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

　　試樣測(cè)定：

　　依次將空白溶液和試樣溶液注入液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用儀中，得到色譜圖，以色譜保留時(shí)間進(jìn)行定性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到試樣溶液中硒代蛋氨酸、硒酸根、亞硒酸根的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米和小麥中硒代蛋氨酸、亞硒酸鹽和硒酸鹽的測(cè)定；玉米中硒代蛋氨酸和硒酸鹽的測(cè)定。

　　當(dāng)樣品稱(chēng)樣量為0.3 g，提取液體積為5 mL時(shí)，硒代蛋氨酸方法定量限為0.015 mg/kg、硒酸鹽方法定量限為0.010 mg/kg、亞硒酸鹽方法定量限為0.007 mg/kg。

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