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組織芯片的制備技術(shù)

來(lái)源：北京伯樂生命科學(xué)發(fā)展有限公司上海辦事處 （上海天崛電子科技有限公司）   2010年05月10日 08:28   961

制備組織芯片的兩個(gè)關(guān)鍵步驟是制備受體蠟塊和從供體石蠟塊中采集微量樣品。雖然至今仍然有很多研究機(jī)構(gòu)采用純粹手工方法進(jìn)行操作，但是各種商業(yè)化機(jī)械制備儀的制作效率和精度更高。

Beecherlnstruments公司的組織陣列排布儀是目前使用較多的制備儀。制備儀包括操作平臺(tái)、特殊的打孔采樣裝置和一個(gè)定位系統(tǒng)。打孔采樣裝置對(duì)供體組織蠟塊進(jìn)行采樣，也可對(duì)受體蠟塊進(jìn)行打孔。定位裝置可使穿刺針或受體蠟塊線性移動(dòng)，從而制備出孔徑、孔距、孔深*相同的組織芯片蠟塊。
 
    受體石蠟塊的一般尺寸為45mmX25mm，高度以5—10mm為宜。石蠟的邊緣常留下2．5～3mm的空白，以防止因石蠟質(zhì)量不好而造成石蠟塊的撕裂。陣列中兩個(gè)相鄰的樣本之間的距離為o．65～1mm。純粹手工操作和機(jī)械化排布儀所用的打孔采樣針的直徑為0．6～2．0mm。根據(jù)針直徑的不同，在一張載玻片上可以排列40～1 000個(gè)組織標(biāo)本。一般按照樣本數(shù)目的多少，將組織芯片分為低密度芯片（~200點(diǎn)）、中密度芯片（200～600點(diǎn)）和高密度芯片（~600點(diǎn)）。常用的組織芯片含有組織標(biāo)本的數(shù)目在50～800個(gè)。
 
    按常規(guī)切片方法進(jìn)行連續(xù)切片，平均每個(gè)微陣列蠟塊可以切片100～200張（厚度4—8／im）。每切40張應(yīng)取1張進(jìn)行HE染色，以鑒別組織學(xué)類型是否仍具代表性。
 
    可選用“輔助切片膠帶轉(zhuǎn)移”系統(tǒng)（包括膠膜、光膠玻片和紫外線燈等）進(jìn)行制片。其使用過程是，將配套膠膜平整地黏附于組織芯片蠟塊表面，切片刀在膠帶下方切片。切下的纖薄組織片即可黏附在膠膜上，再將有組織的膠膜面平放在光膠玻片上，并于紫外線燈下照射約30s，待纖薄組織片與光膠玻片牢固粘連后，去掉膠膜，即制成了組織芯片。但是，也有研究者不建議使用該系統(tǒng)，因?yàn)槭褂貌划?dāng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生假陰性結(jié)果，尤其是進(jìn)行熒光原位雜交分析時(shí)。
 
    典型組織病變部位對(duì)于研究疾病的發(fā)生、發(fā)展和演變十分重要，因而從每一個(gè)組織標(biāo)本塊上進(jìn)行正確的抽樣對(duì)于構(gòu)建組織芯片十分重要。可以通過常規(guī)制作HE染色切片和顯微鏡檢查與分析來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)典型病變部位所在石蠟塊的選擇和定位。在初步評(píng)估并選定洪體石蠟塊以及制作完組織芯片后，建議將這些供體石蠟塊妥善保存，這將有助于以后重新評(píng)估實(shí)驗(yàn)和利用相同供體重建組織芯片。另外，還應(yīng)該將這些供體石蠟塊的基本信息，如組織芯片的坐標(biāo)軸、供體組織編號(hào)以及相應(yīng)的臨床信息等收集在一個(gè)的電腦文檔里。
 
    對(duì)于微流體芯片及芯片實(shí)驗(yàn)室，由于目前還不成熟，并沒有普遍用于醫(yī)學(xué)研究和臨床檢測(cè)之中。 
關(guān)鍵詞：顯微鏡
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