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使用自動細胞計數(shù)儀進行酵母細胞計數(shù)

來源：廣州虹科電子科技有限公司 2025年06月20日 19:16 13

概述

酵母可用于基礎研究、釀造和蒸餾以及食品生產(chǎn)等多種應用，這些應用的全過程都離不開準確的細胞計數(shù)和活力測定。事實證明，較小的尺寸和形態(tài)對于自動細胞計數(shù)儀來說是相當具有挑戰(zhàn)性的，利用活體染色劑手動計數(shù)酵母的方法繁瑣且容易出錯。在這篇文章中，我們分享了如何利用LUNA FX7自動細胞計數(shù)儀準確可靠地對酵母細胞進行計數(shù)。

實驗方法

1.將酵母菌株EC1118接種到YPD肉湯中，30℃、200 rpm培養(yǎng)過夜

2.將酵母按照1：3至1：5的比例稀釋在1XPBS中

3.稀釋的培養(yǎng)物被稀釋成2個相等的樣品，然后將一份樣品熱滅活（65℃，20分鐘）以生成“活細胞和死細胞”，用于活力測試

4.使用酵母細胞緩沖液Ⅱ按細胞：緩沖液=1：5和1：10的比例進一步稀釋細胞

5.活力測試：如表混合活細胞和死細胞

	0%	25%	50%	75%	99%
活细胞	0μl	25μl	50μl	75μl	100μl
死细胞	100μl	75μl	50μl	25μl	0μl

實驗結果

1. LUNA-FX7自動細胞計數(shù)儀計測的細胞活力線性情況

為了確定細胞活力的線性情況，使用活細胞和死細胞制備各種活力的樣品，然后使用LUNA-FX7自動細胞計數(shù)儀進行計數(shù)。使用LUNA-FX7，可以在熒光模式下檢查活力，也可以用明場模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]檢查。

為了在明場模式下測定細胞活力，將酵母樣品與相同體積的0.02%染色劑混合，并將10 μl樣品加載到LUNA細胞計數(shù)載玻片上。酵母樣品制備為死細胞(0%)、25%、50%、75%、活細胞(99%)。

使用LUNA-FX7 自動細胞計數(shù)儀

明場模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]測定細胞活力

用染色并標記的酵母細胞

如圖所示，將5個樣品用0.02%的染色并在明場模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]中進行圖像觀察與拍攝。重復計數(shù)3次，計算平均活力，并據(jù)此確認細胞活力的線性情況。在LUNA FX7明場模式[CELL COUNTING & VIABILITY]測得的活力R2=0.9964，與理論活力高度吻合。

使用LUNA-FX7 自動細胞計數(shù)儀

明場模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]測定細胞活力

線性圖證實了測量的活力與理論預期的活力(R2=0.9964)

緊接著，為了研究熒光模式下的細胞活力，將5個酵母樣品用AO/PI 染色劑染色，并將10 μl樣品加載到Photoslide載玻片中。在AO/PI染色后，拍攝并觀察圖像。

如下圖所示，對5個不同活力的樣品進行3次計數(shù)，測得的酵母細胞活力為R2=0.9979，與理論活力具有顯著相關性。

使用LUNA-FX7 自動細胞計數(shù)儀

熒光模式下的[CELL LINES & PRIMARY CELLS，ADVANCED]測定細胞活力

用吖啶橙/碘化丙啶染色并標記的酵母細胞

使用LUNA-FX7 自動細胞計數(shù)儀

熒光模式下的[CELL LINES & PRIMARY CELLS，ADVANCED]測定細胞活力

線性圖確認了測量的活力和理論上預期的活力(R2=0.9979)

2. LUNA-FX7自動細胞計數(shù)儀細胞濃度分析的線性情況

為了確定使用LUNA-FX7 自動細胞計數(shù)儀計數(shù)酵母時不同濃度的線性，制備了高濃度酵母，并通過連續(xù)稀釋來測量濃度。

為了在明場模式下觀察，用0.02%染色，并分別在明場模式下的[TOTAL CELL COUNTING]和[CELL COUNTING & VIABILITY]中進行計數(shù)。

從圖中可以看出，測得的R2值分別為0.998和0.9991。在熒光模式下也同樣觀察到這一點，當用AO/PI染色并在[ADVANCED]模式下捕獲時，R2值為0.9753。這意味著使用LUNA-FX7進行的酵母計數(shù)顯示出從高濃度到低濃度的高線性度，且使用LUNA-FX7可以進行更準確的測定。

在LUNA-FX7 自動細胞計數(shù)儀的明場模式下測量酵母樣品的濃度

總細胞計數(shù)

細胞計數(shù)和活力

在LUNA-FX7自動細胞計數(shù)儀熒光模式的[CELL LINES & PRIMARY CELLS, ADVANCED]中測量酵母樣品的濃度

2. LUNA-FX7自動細胞計數(shù)儀細胞濃度分析的線性情況

我們進行了一項實驗來比較傳統(tǒng)使用的(Hemocytometer)和LUNA-FX7。

與之前的實驗一樣，樣品用0.02%和AO/PI染色，并各10 µl裝載到、LUNA細胞計數(shù)載玻片和 PhotonSlide載玻片上。在LUNA-FX7的明場和熒光模式兩種模式下拍攝圖像，并將濃度與上測量的濃度進行比較。如圖所示，測量的值與LUNA-FX7測量的值沒有觀察到顯著差異。

和LUNA-FX自動細胞計數(shù)儀的酵母計數(shù)結果比較

結論

在此實驗中，我們證明了LUNA-FX7可以準確可靠地對酵母細胞進行計數(shù)。此外，與傳統(tǒng)的手動計數(shù)方法相比，使用LUNA-FX7計數(shù)酵母的速度快20倍、更可靠且不易出錯。

點成生物細胞計數(shù)解決方案

作為全國的實驗室儀器集成商，點成生物始終致力于為客戶提供的實驗室設備解決方案。

點成Aligned genetics為用戶提供了的自動細胞計數(shù)儀設備，設備具有的精確度和可重復度，單次最多可檢驗8個樣品，細胞計數(shù)濃度范圍廣，內(nèi)置QC軟件提供值得信任的數(shù)據(jù)，還符合21 CFR PART 11法規(guī)。

如果您對自動細胞計數(shù)儀感興趣，歡迎與我們聯(lián)系。

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