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ELISA實(shí)驗(yàn)，即酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）實(shí)驗(yàn)，是免疫學(xué)中的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)之一，它是一種利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法，目前已被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、植物學(xué)、病理學(xué)等多種研究領(lǐng)域。
ELISA實(shí)驗(yàn)是將已知的抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，然后利用酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，再通過顯色物顯色，其顯色深淺與待測物質(zhì)的含量直接相關(guān)，由此可進(jìn)行定性或定量分析。
原理：將抗原或抗體固定于酶標(biāo)板上，然后用酶標(biāo)抗體或抗原直接檢測。
主要用途：分析抗原的免疫反應(yīng)。
優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
l 步驟少，實(shí)驗(yàn)周期短，檢測速度快 l 不需二抗，交叉反應(yīng)較低，實(shí)驗(yàn)不易出錯(cuò) | l 實(shí)驗(yàn)背景高，且檢測對(duì)象有限 l 靈活性差，需要針對(duì)每種靶蛋白的特異性一抗 l 檢測靈敏度不高，沒有使用二抗，信號(hào)沒有放大 |
原理：將抗原或抗體固定于酶標(biāo)板上，隨后分兩步進(jìn)行檢測，先加入檢測抗體或抗原進(jìn)行特異性結(jié)合，后加入酶標(biāo)二抗檢測并利用底物顯色。
主要用途：測定樣品中總抗體的濃度。
優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
l 使用酶標(biāo)二抗，靈敏度高 l 標(biāo)記抗體更少，更加經(jīng)濟(jì)，也更靈活 | l 可能存在交叉反應(yīng)，增加實(shí)驗(yàn)背景 l 增加了二抗孵育步驟，實(shí)驗(yàn)周期延長 |
雙抗體夾心法：將此方法常用于檢測抗原。將抗體固定在固相載體上，加入待測抗原，與抗體特異性結(jié)合，再加入酶標(biāo)抗體檢測，并利用底物顯色，即可測定總靶標(biāo)蛋白的含量。
雙抗原夾心法：反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似，用固相抗原和酶標(biāo)特異性抗原，分別代替固相抗體和酶標(biāo)特異性抗體，即可測定樣品中的抗體。
主要用途：對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn)行分析，適用于檢測具有兩個(gè)以上識(shí)別位點(diǎn)的大分子蛋白。
優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
l 靈敏度和特異性高 l 抗原無需事先純化 | l 對(duì)配對(duì)抗體要求高 |
原理：樣本中的抗原及預(yù)包被的酶標(biāo)抗原，競爭性地與固相抗體相結(jié)合。樣本中的抗原含量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原就越少，最終顯色也越淺。顯色結(jié)果與待檢抗原（或抗體）的量成反比。
主要用途：常用于只有一種抗體可用于目標(biāo)抗原的情況，也適用于檢測不能被兩種不同抗體結(jié)合的小抗原。
優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
l 可檢測不純的樣品，數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高 l 可基于其他ELISA方法，靈活性高 | l 整體敏感性和專一性較差 l 操作繁瑣復(fù)雜 |
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