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總結(jié)：臺(tái)盼藍(lán)和FDA/PI都適用于SF9 細(xì)胞活性評估（圖 1 A），但 FDA/PI 是更優(yōu)的選擇。

臺(tái)盼藍(lán)常用于評估 SF9 細(xì)胞的濃度和活性。然而，我們建議貼壁培養(yǎng)時(shí)避免使用臺(tái)盼藍(lán)，因其在傳代過程中需要物理吹打操作。SF9 細(xì)胞對機(jī)械力和攪拌敏感，貼壁培養(yǎng)時(shí)易產(chǎn)生細(xì)胞碎片，導(dǎo)致臺(tái)盼藍(lán)與樣本中各類顆粒發(fā)生非特異性結(jié)合（懸浮培養(yǎng)中此問題較不明顯）。
在熒光染料組合評估中，采用 AO/PI 染色的 U937 細(xì)胞作為參照驗(yàn)證染料性能。盡管 AO/PI 染色對多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞有效，但其效果因細(xì)胞類型而異。實(shí)驗(yàn)顯示，AO/PI 染色的 SF9 細(xì)胞信號(hào)強(qiáng)度較低，推測可能與昆蟲細(xì)胞基因組尺寸顯著小于哺乳動(dòng)物細(xì)胞有關(guān)。通過將綠光（GF）和紅光（RF）曝光水平從哺乳動(dòng)物細(xì)胞常規(guī)的 5 級(jí)調(diào)整至 7 級(jí)，雖 PI 信號(hào)充足，但 AO 信號(hào)強(qiáng)度仍弱。盡管所有細(xì)胞均被成功標(biāo)記，AO 的弱信號(hào)仍可能影響整體檢測性能（圖 1B）。
綜合上述問題，在測試的染料組合中，F(xiàn)DA/PI 是 SF9 細(xì)胞計(jì)數(shù)和活性評估的。FDA 依賴細(xì)胞酯酶活性（該特性對酵母、昆蟲細(xì)胞等不同類型細(xì)胞均有效，不受基因組大小影響），可在細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生高強(qiáng)度信號(hào)，僅需將 GF 曝光水平降至 1 級(jí)。通過優(yōu)化 LED 參數(shù)（GF 1 / RF 7），F(xiàn)DA/PI 染料組合成為 SF9 細(xì)胞評估的方案。